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简单介绍哺乳动物蛋白表达的定义

发布时间:2022-11-27   点击次数:94次
   蛋白表达系统是指由宿主、外源基因、载体和辅助成分组成的体系。通过这个体系可以实现外源基因在宿主中表达的目的。一般由以下几个部分组成:宿主表达蛋白的生物体。可以为细菌、酵母、植物细胞、动物细胞等。由于各种生物的特性不同,适合表达蛋白的种类也不相同。载体载体的种类与宿主相匹配。根据宿主不同,分为原核(细菌)表达载体、酵母表达载体、植物表达载体、哺乳动物表达载体、昆虫表达载体等。载体中含有外源基因片段。通过载体介导,外源基因可以在宿主中表达。辅助成分有的表达系统中还包括了协助载体进入宿主的辅助成分。比如昆虫-杆状病毒表达体系中的杆状病毒。
  哺乳动物蛋白表达系统的优势能实现翻译后修饰及正确的蛋白折叠复性:哺乳动物为真核细胞,细胞器可以对蛋白正确折叠加工。表达水平高:载体可在哺乳动物细胞中高表达重组蛋白,表达量可高达1-3g/L蛋白表达高效稳定:高效启动子控制,稳定表达,并可以选择多种表达系统选项:瞬时表达、稳定细胞株表达、营养缺陷型细胞株表达(DHFR/GS)、大规模悬浮细胞表达等适合大规模蛋白表达:常用的哺乳动物表达宿主细胞(HEK293和CHO),使用悬浮细胞培养,可以在一个月内可产生数克级蛋白。
  当然哺乳动物表达系统也有它的劣势:曾经,使用哺乳动物细胞表达重组蛋白质的最大问题是是效率低,所表达的蛋白质水平低。然而,诸如HEK293和CHO的细胞系已经分别被开发为有效的瞬时和稳定表达系统。方法原理是使用脂质体、磷酸钙或PEG作为转染试剂瞬时转染HEK293细胞。虽然瞬态表达相对容易和简单,但扩大规模却在技术上存在挑战性。CHO细胞通常用于稳定表达大量重组蛋白。

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