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DNA pull down是体外研究DNA与蛋白互作的有力工具

发布时间:2022-12-21   点击次数:69次
  DNA Pull Down是一种研究DNA与蛋白互作的方法。其原理是:标记的DNA片段结合在链霉亲和素磁珠上,再与核蛋白孵育,从而捕获并纯化出与DNA片段互作的蛋白。捕获的蛋白一方面可以通过Western blot验证某一特定蛋白是否与靶DNA片段结合;另一方面也可以进行质谱鉴定,筛选出与DNA片段可能互作的蛋白质。
  链霉亲和素之间的相互作用是已知的强烈的非共价相互作用。其中,活化的可以与几乎所有已知的由蛋白质交联剂介导的生物大分子偶联。因此,用标记核酸后,可以利用和链霉亲和素之间的亲和相互作用来纯化多种生物分子复合物。
  DNA下拉实验从设计用于目标区域的DNA探针开始,该探针用脱硫标记,并与与磁珠偶联的链霉亲和素结合。细胞核提取物与珠子-DNA探针一起孵育以纯化与目标DNA片段结合的蛋白质复合物,然后将其洗脱以获得DNA片段的结合蛋白质。
  DNA pull down是体外研究DNA与蛋白互作的有力工具。该技术将标记的DNA片段结合在链霉亲和素磁珠上,再与细胞核蛋白孵育,纯化出与DNA片段互作的蛋白,洗涤洗脱得到的蛋白产物,做western-blot检测特定蛋白是否与靶DNA片段结合;做质谱鉴定即可筛选出与DNA片段可能互作的蛋白信息(如具体某个或某些转录因子/组蛋白等)。

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