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酵母双杂交在蛋白互作研究中的应用

发布时间:2021-07-27   点击次数:532次
  酵母双杂交技术以其简便、灵敏、高效以及能够反映不同蛋白质之间在活细胞内的相互作用等特点,对其技术进行改进,将使其在蛋白互作的研究中得到更为广泛的应用。
  基因克隆是分子生物学中的一种基本的操作方法,通过双酶切来构建载体是其中常用的一种方法,这种方法利用限制性内切酶可以识别并切割特定的核苷酸的原理,用两种不同的限制性内切酶切割靶基因得到前后都带有粘性末端的靶基因片段,与同样经两种限制性内切酶切割得到的带有相同粘性末端的线性载体在T4DNA连接酶作用下进行连接,从而实现基因克隆酶切效率及连接效率不高等问题,致使靶基因片段插入载体相当困难,为此人们采取了多种策略进行克隆。后来开发了一种叫做同源重组的基因克隆方法。
  相比之下,同源重组方法构建载体操作相对简单易行。相比双酶切载体构建方法,该方法的构建过程有些不同。首先,靶基因片段扩增引物有别于常规引物设计;其次,载体切割过程中只需要进行单酶切;第三,载体和目的基因片段的连接是基于同源重组而不是粘性末端互补。在实际操作过程中,双酶切方法和同源重组方法各有优势。同源重组方法构建载体中最有代表性的是Gateway方法。

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