更新时间:2024-08-07
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蛋白Pull down技术将目标蛋白进行体外原核表达,使标签蛋白(Halo、GST、His等)与目标蛋白融合表达,可以不受抗体、物种限制仅借助标签的亲和介质将目标蛋白纯化出来,目标蛋白在纯化过程中可以将与其能够发生作用的蛋白“下拉”下来,进而利用蛋胶、Western Blot或者质谱鉴定拉下来的蛋白质,这些蛋白即与目标蛋白相互作用的蛋白。蛋白Pull down实验还可以通过外源同时表达目标蛋白和待测蛋白,利用Pull down点对点的确定它们是否发生直接的相互作用,也可以仅表达蛋白质的结合区域进行蛋白Pull down,确定两个蛋白结合的结构域。
本公司主要提供Halo/GST-tag pull down:Halo-tag pull down是使用体外真核表达系统来表达目的蛋白,表达的目的蛋白携带Halo标签;GST-tag pull down是使用大肠杆菌诱导表达目的蛋白,表达的目的蛋白携带GST标签,也可以利用其它标签蛋白进行pull down实验。
Halo/FLAG-tag pull down技术优势:
真核表达系统,蛋白更接近体内结构
没有细胞内干扰因素的限制,表达成功率高
蛋白表达载体构建成功后,不需要转化和鉴定,可直接表达目的蛋白,节省时间
步骤 | 内容 | 交付内容 | 周期 |
载体构建 |
| 测序结果 | 1-2周 |
无细胞表达+纯化 |
| 表达评估报告 | 1周 |
Pull Down |
| 银染结果 | 1周 |
质谱检测 |
| 质谱结果 | 2周 |
客户提供材料 | 交付结果 |
新鲜样本(组织或者细胞):细胞数量>2.7ⅹ107; 组织样本>3g | 载体测序结果 实验过程图 质谱结果 |
蛋白Pull Down结果示例
蛋白Pull Down应用案例
2023年12月,北京林业大学和蓝景科信合作,在植物学主流学术期刊Plant Stress(IF=5.0)上,发表了题为“Populus euphratica CPK21 interacts with heavy metal stress-associated proteins to mediate Cd tolerance in Arabidopsis”的研究成果。该研究借助HaloTag pull-down技术鉴定了胡杨CPK21的互作蛋白,为揭示胡杨CPK21调控植物Cd耐受的分子机制研究提供了技术支撑。
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