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蛋白 Pull Down(蛋白和蛋白互作)

更新时间:2024-03-19

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厂商性质:生产厂家

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简要描述:
Halo Pull Down(蛋白和蛋白互作)技术是将Halo标签的融合蛋白固相化到磁珠上,与细胞总蛋白进行孵育,鉴定与之相互作用的蛋白。该方法可以鉴定与已知蛋白相互作用的未知蛋白,也可以鉴定两个已知蛋白间是否存在相互作用。
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蛋白Pull down技术将目标蛋白进行体外原核表达,使标签蛋白(Halo、GST、His等)与目标蛋白融合表达,可以不受抗体、物种限制仅借助标签的亲和介质将目标蛋白纯化出来,目标蛋白在纯化过程中可以将与其能够发生作用的蛋白“下拉”下来,进而利用蛋胶、Western Blot或者质谱鉴定拉下来的蛋白质,这些蛋白即与目标蛋白相互作用的蛋白。蛋白Pull down实验还可以通过外源同时表达目标蛋白和待测蛋白,利用Pull down点对点的确定它们是否发生直接的相互作用,也可以仅表达蛋白质的结合区域进行蛋白Pull down,确定两个蛋白结合的结构域。

本公司主要提供Halo/GST-tag pull down:Halo-tag pull down是使用体外真核表达系统来表达目的蛋白,表达的目的蛋白携带Halo标签;GST-tag pull down是使用大肠杆菌诱导表达目的蛋白,表达的目的蛋白携带GST标签,也可以利用其它标签蛋白进行pull down实验。

Halo/FLAG-tag pull down技术优势:

真核表达系统,蛋白更接近体内结构

没有细胞内干扰因素的限制,表达成功率高

蛋白表达载体构建成功后,不需要转化和鉴定,可直接表达目的蛋白,节省时间

步骤 内容 交付内容 周期
载体构建
  • 客户提供目的蛋白对应的CDS的序列或质粒,

  • 克隆至合适的表达载体,

  • 质粒测序,

  • 质粒制备。

测序结果 1-2周
无细胞表达+纯化
  • 用小麦芽胚蛋白表达体系进行蛋白表达,

  • 蛋白表达评估 (Western Blot) 。

表达评估报告 1周
Pull Down
  • 细胞裂解,

  • 目的蛋白和总蛋白孵育,

  • 洗脱与目的蛋白结合的蛋白。

银染结果 1周
质谱检测
  • 将洗脱的蛋白进行质谱鉴定。

质谱结果 2周

 

客户提供材料 交付结果

新鲜样本(组织或者细胞):细胞数量>2.7ⅹ107

组织样本>3g

载体测序结果

实验过程图

质谱结果

蛋白Pull Down 技术流程

 

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蛋白Pull Down结果示例

结果.pngGO结果.pngKEGG结果.png

蛋白Pull Down应用案例

2023年12月,北京林业大学和蓝景科信合作,在植物学主流学术期刊Plant Stress(IF=5.0)上,发表了题为“Populus euphratica CPK21 interacts with heavy metal stress-associated proteins to mediate Cd tolerance in Arabidopsis”的研究成果。该研究借助HaloTag pull-down技术鉴定了胡杨CPK21的互作蛋白,为揭示胡杨CPK21调控植物Cd耐受的分子机制研究提供了技术支撑。

 

 

 

 

 

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