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抗siPOOL回补序列(进一步的RNA干扰验证)

更新时间:2023-08-07

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厂商性质:生产厂家

生产地址:德国

简要描述:
抗siPOOL回补序列(进一步的RNA干扰验证)。
抗siPOOL回补序列(siPOOL-resistant rescue constructs),用于进一步的基因敲低验证实验。
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抗siPOOL回补序列(进一步的RNA干扰验证)



抗siPOOL回补序列(siPOOL-resistant rescue constructs)
用于进一步的基因敲低验证实验

为了进一步验证siPOOL产生的功能缺失表型是针对目标基因的,因此,我们将为您提供一个抗siPOOL的回补序列。当抗siPOOL回补序列在构建的质粒中表达时,靶基因的功能得到恢复,从而挽救或逆转目标基因功能缺失的表型。

图1. 抗siPOOL的回补序列设计。橙色表示目的基因上的siRNA识别位点。其中,突出显示编码序列(CDS)上的一个siRNA识别位点。举例:GTC密码子(编码Val氨基酸)与替代密码子如图所示,粗体显示了转录组中含量较高的替代密码子。

设计步骤:

  1. 在siRNA识别位点选择替代密码子,改变mRNA序列,但不改变蛋白质。

  2. 对所有CDS中siRNA识别位点的所有密码子进行替换,直到达到足够的错配。

  3. 去除常见的限制性内切酶位点,添加侧翼序列,将抗siPOOL的CDS克隆到载体中。


客户数据:
案例1siPOOL降低了激酶(X)的表达。抗siPOOL回补序列的表达恢复了激酶X的表达和功能,这表明了磷酸化底物Xp-底物X)的存在。

2. siPOOL介导的敲低和回补实验前后,Western blot实验检测靶激酶X及其磷酸化底物(数据由未披露的客户提供)。


案例2复合物的形成(通过荧光互相关光谱测量,FCCS)在一个携带标记物的siPOOL介导的敲减后减少。而通过表达抗siPOOL回补序列,能够恢复复合物的形成。

图3. 在siPOOL介导的敲减和回补实验中,通过FCCS测量两个荧光标记蛋白之间的复合物形成(数据由Intana Bioscience GmbH友情提供)。

抗siPOOL回补序列可以作为序列数据文件提供,或也可以克隆到标准/自定义结构中提供。欢迎联系我们详询抗siPOOL回补序列(进一步的RNA干扰验证)

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