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分析影响电泳迁移率的因素

发布时间:2021-10-23   点击次数:44次
  带电粒子在单位时间内移动的距离称为电泳迁移率。溶液中带电粒子在电场(E)中向着与它相异电荷的电极移动,它的移动速度(V)是电场(E)和粒子的有效迁移率(m)的乘积,即:V=mE
  离子的有效迁移率是一个由许多因素(包括离子半径、溶剂化作用、介电常数、溶剂粘度、离子形状和电荷、pH、解离度和温度等)决定的物化系数。不同有效迁移率的粒子有不同的移动速度,因而可以彼此分离。
  一般情况下电泳中蛋白质分子量对数与迁移率呈线性关系具体由凝胶的情况决定线性的范围也是一定的。
  DNA分子大小迁移速率V与logN成反比(N为碱基对数目)。分子越大,摩擦阻力越大,同时大分子通过凝胶孔径的效率也低于较小的分子,所以分子大的迁移慢。等量的空间结构,紧密的电泳快(超螺旋>线性DNA)一般来说,分子带的电荷量越大、直径越小、形状越接近球形,则其电泳迁移速度越快。
  简言之,浓度越大,分子孔径就越小,DNA迁移速率就越低,反之,迁移速率就大。另外,浓度也跟凝胶的分辨率有关,浓度越大,分辨率越高,但分离的DNA片段就越小。
  一般迁移速率超螺旋环状>线状DNA>单链开环。
  低电压时,线状DNA片段的迁移速率与所加电压成正比。使分辨效果好,凝胶上所加电压不应超过5-8V/cm
  包括标准琼脂糖和低熔点琼脂糖以及正在研制的介于二者之间的琼脂糖。其分辨率等各有不同。
  研究结果表明:在低浓度、低电压下,分离效果较好。在低电压条件下,线性DNA分子的电泳迁移率与所用的电压呈正比。但是,在电场强度增加时,较大的DNA片段迁移率的增加相对较小。因此随着电压的增高,电泳分辨率反而下降,为了获得电泳分离DNA片段的最大分辨率,电场强度不宜高于15V/cm。一般在5-10v之间。电泳系统的温度对于DNA在琼脂糖凝胶中的电泳行为没有显著的影响。通常在室温下进行电泳,只有当凝胶浓度低于0.5%时,为增加凝胶硬度,可在4℃,进行电泳。

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