RNA pull down（RNA和蛋白互作）

RNA pull down（RNA和蛋白互作）

RNA pull down是体外研究RNA与蛋白互作的一项重要技术。该技术是用biotin标记体外转录的靶RNA分子，再用链霉亲和素纯化出与靶RNA结合的蛋白复合体，洗脱得到RNA结合蛋白质。再通过Western blot实验检测特定的RNA结合蛋白是否与靶RNA结合；或通过质谱仪检测可以筛选出与靶RNA结合的蛋白。

biotin与链霉亲和素间的作用，是目前已知强度最高的非共价作用。其中，活化biotin可以在蛋白质交联剂的介导下，与已知的几乎所有生物大分子偶联。因此，用biotin标记核酸后，可以纯化出与该核酸结合的各种生物大分子复合物。

实验流程

• 探针设计及标记：体外转录或合成获取RNA，biotin标记;

• pull-down：与细胞裂解液孵育，形成RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链霉亲和素磁珠结合，从而把靶RNA结合蛋白从细胞裂解液中分离出来，经过洗涤将非特异性结合蛋白质去除；最后，洗脱得到与靶RNA结合的蛋白质复合物；

• 互作蛋白质鉴定：再经过Western Blot或质谱(MS)鉴定蛋白质。

服务内容

• 体外转录或合成RNA，biotin标记；

• 细胞培养与细胞裂解液制备；

• pull-down捕获互作蛋白；

• Western blot验证特定的蛋白；

• MS鉴定潜在的互作蛋白。

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