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RNA pull down(RNA和蛋白互作)

更新时间:2024-03-19

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简要描述:
RNA pull down(RNA和蛋白互作)是体外研究RNA与蛋白互作的一项重要技术。

RNA pull down(RNA和蛋白互作)

 

RNA pull down是体外研究RNA与蛋白互作的一项重要技术。该技术是用biotin标记体外转录的靶RNA分子,再用链霉亲和素纯化出与靶RNA结合的蛋白复合体,洗脱得到RNA结合蛋白质。再通过Western blot实验检测特定的RNA结合蛋白是否与靶RNA结合;或通过质谱仪检测可以筛选出与靶RNA结合的蛋白。

biotin与链霉亲和素间的作用,是目前已知强度最高的非共价作用。其中,活化biotin可以在蛋白质交联剂的介导下,与已知的几乎所有生物大分子偶联。因此,用biotin标记核酸后,可以纯化出与该核酸结合的各种生物大分子复合物。

实验流程

  • 探针设计及标记:体外转录或合成获取RNA,biotin标记;

  • pull-down:与细胞裂解液孵育,形成RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链霉亲和素磁珠结合,从而把靶RNA结合蛋白从细胞裂解液中分离出来,经过洗涤将非特异性结合蛋白质去除;最后,洗脱得到与靶RNA结合的蛋白质复合物;

  • 互作蛋白质鉴定:再经过Western Blot或质谱(MS)鉴定蛋白质。


服务内容

  • 体外转录或合成RNA,biotin标记;

  • 细胞培养与细胞裂解液制备;

  • pull-down捕获互作蛋白;

  • Western blot验证特定的蛋白;

  • MS鉴定潜在的互作蛋白。

 

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