更新时间:2025-01-22
访问量:140
厂商性质:生产厂家
生产地址:
品牌 | mich |
---|
组织样本处理:1.称取5~20 mg新鲜或-80℃冻存的组织,在研钵中加入液氮充分研磨成粉末状。2.将研磨好的粉末迅速转移到预先装有500 μL裂解液1、80 μL核酸保护剂6和20 μL蛋白酶K的离心管中,震荡混匀15~30s,在室温下放置10 min孵育。注:如使用组织研磨仪钢珠研磨,可在研磨后将500 μL裂解液、80 μL核酸保护剂和20 μL蛋白酶K加入到研磨管中。 3.孵育后,12,000 rpm (~13,400×g)离心5 min,转移500 μL上清至96孔样品板中。血清样本处理:1.在不解冻的情况下,在装有250 μL血清的离心管中加入250 μL裂解液、80 μL核酸保护剂和20 μL蛋白酶K,震荡混匀15~30 s,在室温下放置10 min孵育。注:不要在没有试剂的情况下解冻血清样本,这将导致RNA降解2.转移500 μL上清至96孔样品板中。新鲜全血样本处理1.取新鲜抗凝血,加入6~10倍体积的红细胞裂解液。2.在冰上孵育5~10 min。在孵育过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。注:对于鼠的血液,裂解5 min即可,对于人的外周血,裂解应延长到10 min。注:在孵育的过程中溶液将变成半透明状态,表明红细胞裂解。如果必要的话,孵育时间可延长至20 min。3.4℃条件下2,100 rpm(~400×g)离心10 min,将上清去除。注:如发现红细胞没有裂解完毕,可以重复步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。4.向白细胞沉淀中加入2倍红细胞裂解液,重悬细胞。5.4℃条件下2,100rpm离心10 min,将上清去除。6.向白细胞沉淀中加入裂解液1,具体加量按照下表进行,涡旋或使用移液器混匀。注:如果血液不是健康人血,需要根据血液中白细胞的数量来确定所需裂解液1的体积,此时细胞应裂解,块状细胞沉淀消失。裂解液1 全血(mL) 白细胞数量300 多至0.5 多至2×106600 0.5~1.5 2×106至1×1077.转移300 μL上清至96孔样品板中。